1. 填裝之前，檢查層析柱各接頭、部件不能有破損漏氣，并將層析柱清洗干凈，壁上不要有殘留小顆粒，會影響層析效果；

2. 確保填料、層析柱、所有的緩沖液以及樣品溫度一致，溫度不一致容易導致產生氣泡。

3. 所有過柱子的液體（包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液、再生溶液）用0.45um濾膜抽濾，并進行超聲脫氣，注意填料不可超聲脫氣；

4. 將填料用純水清洗幾遍，徹底洗掉保存液，并將上層的細小顆粒棄去；

5. 關閉層析柱出水口，玻璃棒引流往層析柱內倒入約1/4柱體積的水（或緩沖液），務必使底端無氣泡；

6. 將填料用玻璃棒攪勻成懸漿，用玻璃棒引流，均勻的一次性倒入柱子內，注意務必不要產生氣泡，待柱子內填料穩定，打開出液管，使凝膠在柱內自由沉降。

7. 如果是手動操作，將柱子用純水沖幾個柱體積，使柱床穩定；

如果儀器操作，用逐漸加大流速的方法，將填料壓實，注意：既不能過松，也不能過緊，要注意不能超過填料的最大耐壓。

8. 上樣前，樣品要進行離心或者用0.45um濾膜過濾；

注意：

1. 始終保持柱內液面高于凝膠表面，否則水分蒸發，凝膠變干，影響填料的純化效果，有轉換接頭的柱子，需要保證進出液管密封；

2. 防止液體流干，使柱內混入大量氣泡，影響純化效果；

3. 切莫超過填料的最大耐壓，以免對填料造成不可逆的損壞；

4. 注意不要超過層析柱的最大耐壓，超過最大耐壓可能會漏液，甚至沖掉柱頭；

5. 凝膠一般都比較昂貴，需小心操作，實驗后回收，盡量避免污染、浪費和損失。